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DETALLE DEL EXÁMEN
Adenovirus antígeno fecal (ELISA)
Sección: Microbiología
Código: MB010
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Descripción

Detección cualitativa de antígeno de adenovirus mediante enzimoinmunoensayo de microplaca en fase sólida con anticuerpos monoclonales en muestra de heces. La prueba detecta específicamente un antígeno estructural de la cápside del virus (hexon) común al género adenovirus, que se encuentra presente en todos los serotipos humanos, incluido los serotipos entéricos 40/41 (Cepko CL et al. J Clin Microbiol 1983;17:360-4).

Utilidad Clínica

Este examen es para ser utilizado en el diagnóstico de gastroenteritis aguda por adenovirus en niños. El diagnóstico confirmado por laboratorio de las infecciones por adenovirus juega un importante rol en el manejo de casos individuales y control de brotes (Gonçalves G et al. Epidemiol Infect 2010;15:1-4). Los métodos de diagnóstico posibles incluyen: 1) detección de anticuerpos específicos en muestras pareadas de sangre, 2) aislamiento del virus en cultivos celulares a partir de secreciones oculares o respiratorias o muestras fecales y 3) detección directa del virus o alguna de sus proteínas en especímenes clínicos. De todos estos métodos, la detección de una proteína viral mediante enzimoinmunoensayo es actualmente el método de elección por ser rápido, relativamente fácil de hacer, muy sensible y específicopara confirmar la presencia de adenovirus en heces (Herrmann JE et al. J Infect Dis 1987;155:1167-71).

Información clínica

Los adenovirus son virus DNA de doble filamento, no-recubiertos, con una estructura típica de icosaedro. Se conocen al menos 52 serotipos, responsables de una gran variedad de síndromes infecciosos incluyendo infección respiratoria aguda, síndrome de pertusis, fiebre faringo-conjuntival, queratoconjuntivitis epidémica, conjuntivitis aguda hemorrágica, cistitis hemorrágica y gastroenteritis (Wadell G. Adenoviruses. In Principles and Practice of Clinical Virology. AJ Zuckerman et al eds. John Willey & Son Ltd, pp 267-87,1990). La gastroenteritis aguda se asocia comúnmente a los serotipos 40 y 41 del subgénero F (Uhnoo I et al. J Clin Microbiol 1984;20:365-72). Adenovirus puede ser la causa de 4% a 14% de los casos de gastroenteritis en niños (Herrmann JE et al. J Clin Microbiol 1988;26:1783-6), (Uhnoo I et al. J Clin Microbiol 1984;20:365-72), siendo el tercer virus en importancia después de rotavirus y norovirus en esta enfermedad. La enfermedad afecta primariamente a niños menores de 2 años de edad y ocurre por igual todo el año. Se presenta con diarrea acuosa, acompañada de vómitos, fiebre no muy alta y algún grado de deshidratación. Una característica distintiva del adenovirus es su tendencia a producir una diarrea más prolongada y persistente que los otros virus enteropatógenos (Grimwood K et al. J Clin Microbiol 1995;33:131-6).

Muestra

Heces frescas, refrigeradas o congeladas, en recipiente apropiado

Recipiente

Frasco limpio, seco, de boca ancha y tapa hermética

Volumen

Mínimo 5 mL (5 g) – Mayor cantidad si conjuntamente se solicitan otros exámenes.

Instrucciones para obtención y transporte de la muestra

Obtener la muestra en frasco limpio, seco, de boca ancha y tapa hermética. No mezclar la muestra con orina, cremas, talco o sustancias desinfectantes. Colectar la mayor cantidad posible. En niños pequeños colocar el pañal al revés (por la parte no absorbente), cubrir la salida de la uretra con un trozo de algodón (para no contaminar la muestra con orina) y trasvasar la muestra al frasco. Muestras en pañal no son aceptables. Enviar la muestra al laboratorio inmediatamente después de su obtención en caja térmica con refrigerantes. Muestras de lugares fuera de Lima o que no pueden ser enviadas al laboratorio antes de 3 horas desde su obtención deben ser congeladas a -20°C hasta su envío. Muestras en un medio de preservación como Cary-Blair NO son aceptables para esta prueba. No colectar la muestra en recipientes que contengan medios de transporte, formol o compuestos similares, sueros animales, iones metálicos, agentes oxidantes o detergentes debido a posibles interferencias con la prueba.

Método de análisis

Enzimoinmunoensayo (ELISA) de microplaca en fase sólida con anticuerpos monoclonales. Los pocillos de la microplaca de titulación están recubiertos con anticuerpo monoclonal contra el hexon geno-específico de adenovirus. El sobrenadante de una suspensión de la muestra, así como un anticuerpo monoclonal marcado con peroxidasa se pipetean en los pocillos. El antígeno de adenovirus presente en la suspensión de la muestra es capturado entre el anticuerpo adherido en la microplaca y el anticuerpo marcado con peroxidasa formando un complejo ‘sándwich’. Se incuba por 60 minutos y se lava la microplaca para eliminar cualquier exceso de muestra o conjugado de enzima que no se haya combinado. Se añade un cromógeno y se incuba por 10 minutos. Si en la muestra hay antígeno de adenovirus, el contenido del pocillo cambia de color. Se añade a continuación un reactivo de parada y se lee la absorbancia en espectrofotómetro a 450/620 nm. La absorbancia se expresa como positiva o negativa según el valor límite (cut off).

Rango de resultados

Positivo o negativo

Rango normal

No hay antígeno de adenovirus

Tiempo de entrega de resultados

24 horas o antes, desde recibida la muestra

Interpretación de resultados

Esta prueba en formato ELISA detecta, mediante anticuerpos monoclonales, un antígeno común a todos los adenovirus humanos, incluyendo los serotipos 40/41 que están relacionados con gastroenteritis aguda en niños. Comparado con microscopía electrónica y análisis de restricción con endonucleasas del DNA del virus, la prueba de detección del antígeno fecal de adenovirus con anticuerpos monoclonales tiene una especificidad de 99.0% y una sensibilidad de 90.1% (Uhnoo I et al. J Clin Microbiol 1984;20:365-72). Un resultado POSITIVO con esta prueba, por tanto, indica firmemente la presencia de adenovirus y que este podría ser la causa de los síntomas del paciente. Si el resultado se informa NEGATIVO es probable que adenovirus no esté realmente en el intestino, aunque no excluye completamente el diagnóstico. Un resultado falso NEGATIVO puede deberse a una carga viral por debajo del nivel de detección del ELISA al momento de colectar la muestra o a un deterioro del antígeno viral durante su trasporte al laboratorio. Esta prueba es específica para adenovirus, un resultado POSITIVO o NEGATIVO con esta prueba no excluye la presencia de otros agentes enteropatógenos. Esta información es sólo para ser tomada en cuenta. El médico es el más indicado para decidir lo que se deba hacer en base a los síntomas, el cuadro clínico y el resultado de esta prueba.

Limitaciones y recomendaciones
  1. Mantener la muestra refrigerada desde su obtención hasta la llegada al laboratorio; el antígeno del adenovirus puede deteriorarse en muestras expuestas a temperaturas elevadas durante el transporte al laboratorio;
  2. El antígeno fecal de adenovirus es detectable desde el comienzo de la enfermedad; el pico de excreción de adenovirus en heces en pacientes con gastroenteritis ocurre 3-13 días después del inicio de los síntomas y luego decae rápidamente; para un mejor resultado, las muestras fecales deben obtenerse tan pronto empiezan los primeros síntomas;
  3. Esta prueba detecta el antígeno de adenovirus común a todos los serotipos humanos; un resultado POSITIVO en muestra fecal de un paciente con diarrea es altamente sugestiva de gastroenteritis por adenovirus de los serotipos 40/41;
  4. Un resultado POSITIVO debe interpretarse con cierta cautela ya que está descrito el estado de excretor asintomático de adenovirus (Van R et al. J Pediatr 1992;120:516-21); 
  5. Un resultado NEGATIVO no excluye la posibilidad de infección por adenovirus – el resultado NEGATIVO puede deberse a que la muestra se colectó cuando la excreción fecal del virus había declinado a niveles por debajo del nivel de detección del ELISA o a un deterioro del antígeno durante su trasporte al laboratorio; si el resultado de la prueba es NEGATIVO y la sospecha de la infección es muy fuerte puede ser conveniente repetir la prueba en una nueva muestra.
Horario de recepción de muestras

Lunes a Viernes de 7:00 AM a 8:30 PM
Sábados de 7:00 AM a 6:30 PM

Referencias
  1. Cepko CL et al. Adenovirus hexon monoclonal antibody that is group specific and potentially useful as a diagnostic reagent. J Clin Microbiol 1983;17:360-4 PubMed 6339552
  2. Gonçalves G et al. Outbreak of acute gastroenteritis caused by adenovirus type 41 in a kindergarten. Epidemiol Infect 2010;15:1-4 PubMed 21156097
  3. Herrmann JE et al. Antigen detection with monoclonal antibodies for the diagnosis of adenovirus gastroenteritis. J Infect Dis 1987;155:1167-71 PubMed 3033091
  4. Wadell G. Adenoviruses. In Principles and Practice of Clinical Virology. AJ Zuckerman et al eds. John Willey & Son Ltd, pp 267-87,1990
  5. Uhnoo I et al. Importance of enteric adenovirus 40 and 41 in acute gastroenteritis in infants and Young children. J Clin Microbiol 1984;20:365-72 PubMed 6092424
  6. Herrmann JE et al. Incidence of enteric adenoviruses among children in Thailand and the significance of these viruses in gastroenteritis. J Clin Microbiol 1988;26:1783-6 PubMed 2846648
  7. Grimwood K et al. Patients with enteric adenovirus gastroenterrits admited to an Australian pediatric teaching hospital from 1981 to 1992. J Clin Microbiol 1995;33:131-6 Pub Med 7699028
  8. Van R et al. Outbreaks of human enteric adenovirus types 40 and 41 in Houston day care centers. J Pediatr 1992;120:516-21 PubMed 1313095

Ultima revisión

Enero 2014