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DETALLE DEL EXÁMEN
Rotavirus antígeno fecal (ELISA)
Sección: Microbiología
Código: MB008
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Descripción

Detección cualitativa de antígeno fecal de rotavirus (Grupo A) mediante enzimoinmunoensayo de microplaca en fase sólida con anticuerpos policlonales en muestra de heces fresca, refrigerada o congelada.

Utilidad Clínica

Este examen es para ser utilizado como ayuda diagnóstica en pacientes con gastroenteritis aguda para detectar la presencia de rotavirus. Es también útil en la investigación de brotes de diarrea en instituciones como guarderías, nidos, salas de hospitalización y asilos. La detección del antígeno fecal de rotavirus mediante ELISA tiene mejor precisión diagnóstica que con la técnica de látex (Moosai RB et al. J Clin Pathol 1985;38:694-700).

Información clínica

Rotavirus es la causa más común de diarrea infecciosa no bacteriana, especialmente en niños hasta los 2-3 años de edad (Ehrenkranz P et al. Pan Am J Public Health 2001;10:240-7). Puede afectar también a niños mayores y adultos aunque en este grupo los síntomas suelen ser más leves y la enfermedad más corta excepto si es un adulto mayor o tiene alguna condición de inmunosupresión (Anderson EJ et al. Lancet Infect Dis 2004;4:91-9). La infección por rotavirus ocurre todo el año aunque tiende a aumentar durante los meses de invierno (Török TJ et al. Pediatr Infect Dis J 1997;16:941-6). Es un virus altamente transmisible que puede fácilmente ocasionar brotes con numerosos casos en instituciones como hospitales, guarderías, nidos y asilos (Festini F et al. BMC Infect Dis 2010;10:235). Las medidas sanitarias convencionales de higiene no son por lo general suficientes para evitar la transmisión del rotavirus (Velazquez FR et al. Ped Infect Dis J 2004;23:S149-S55). La prevención más efectiva de esta infección se logra con vacunas (Committee on infectious diseases. Pediatrics 2009;123:1412-20). La enfermedad típica se inicia de manera brusca primero con vómitos y fiebre seguido horas después por diarreas acuosas sin moco o sangre (Staat MA et al. Pediatr Infect Dis J 2002;21:221-7); toda la enfermedad puede durar de 5 a 8 días independientemente de la edad del paciente (Albano F et al. Eur J Pediatr 2007;166:241-7).

Muestra

Heces frescas, refrigeradas o congeladas, en recipiente apropiado

Recipiente

Frasco limpio, seco, de boca ancha y tapa hermética

Volumen

Mínimo 5 mL (5 g) – Mayor cantidad si conjuntamente se solicitan otros exámenes

Instrucciones para obtención y transporte de la muestra

Obtener la muestra en frasco limpio de boca ancha y tapa hermética. No mezclar la muestra con orina, cremas o talco. Colectar la mayor cantidad posible. En niños pequeños colocar el pañal al revés (por la parte no absorbente), cubrir la salida de la uretra con un trozo de algodón (para no contaminar la muestra con orina) y trasvasar la muestra al frasco. Muestras en pañal no son aceptables. Enviar la muestra al laboratorio inmediatamente después de su obtención en caja térmica con refrigerantes. Muestras de lugares fuera de Lima o que no pueden ser enviadas al laboratorio antes de 3 horas desde su obtención deben ser congeladas a -20°C hasta su envío. Muestras en un medio de preservación como Cary-Blair no son aceptables para esta prueba. No colectar la muestra en recipientes que contengan medios de transporte, formol o compuestos similares, sueros animales, iones metálicos, agentes oxidantes o detergentes debido a posibles interferencias con la prueba.

Método de análisis

Enzimoinmunoensayo (ELISA) de microplaca en fase sólida con anticuerpos policlonales. Los pocillos de la microplaca de titulación están recubiertos con anticuerpo policlonal contra antígeno específico de rotavirus Grupo A. El sobrenadante de una suspensión de la muestra, así como el anticuerpo policlonal marcado con peroxidasa se pipetean en los pocillos. El antígeno de rotavirus presente en la suspensión de la muestra se une tanto al anticuerpo en la microplaca, como al anticuerpo marcado con peroxidasa formando un complejo ‘sándwich’. El conjugado de enzima que no se combina se elimina mediante el lavado de la microplaca. Después de añadir el sustrato, si la muestra es positiva, la enzima enlazada transforma el color de la solución en los pocillos de la microplaca de incolora hacia el azul. Mediante la adición del reactivo de parada se lleva a cabo un cambio de color del azul al amarillo. La absorbancia se lee en espectrofotómetro a 450/620 nm y se expresa como positiva o negativa en relación al valor límite predeterminado (cut off).

Rango de resultados

Positivo o negativo

Rango normal

No hay antígeno de rotavirus

Tiempo de entrega de resultados

6 – 12 horas desde recibida la muestra

Interpretación de resultados

Comparado con microscopía electrónica y otra prueba ELISA de referencia, la prueba de detección del antígeno fecal de rotavirus con anticuerpos policlonales tiene una especificidad de 99.2% (Kok TW et al. J Clin Microbiol 1989;27:364-6) por lo que un resultado POSITIVO con esta prueba confirma que hay una infección intestinal por rotavirus y que ésta podría ser la causa de los síntomas del paciente. Si el resultado se informa NEGATIVO es probable que no haya realmente una infección por rotavirus. La sensibilidad de esta prueba es de 100.0% (Kok TW et al. J Clin Microbiol 1989;27:364-6). Un resultado falso NEGATIVO (la enfermedad existe pero la prueba no lo detecta) puede deberse a que la muestra se colectó cuando la excreción fecal del virus había declinado a niveles por debajo del nivel de detección del ELISA o a un deterioro del antígeno durante su trasporte al laboratorio (ver más abajo, limitaciones y recomendaciones). Esta prueba es específica para rotavirus, un resultado POSITIVO o NEGATIVO con esta prueba no excluye la presencia de otros agentes enteropatógenos. Esta información es sólo para ser tomada en cuenta. El médico es el más indicado para decidir lo que se deba hacer en base a los síntomas, el cuadro clínico y el resultado de esta prueba.

Limitaciones y recomendaciones
  1. Mantener la muestra refrigerada desde su obtención hasta la llegada al laboratorio; el antígeno del rotavirus puede deteriorarse en muestras expuestas a temperaturas elevadas durante el transporte al laboratorio;
  2. El antígeno fecal de rotavirus es detectable desde el comienzo de la enfermedad, el pico de excreción ocurre 3-5 días después del inicio de los síntomas y decae rápidamente; para un mejor resultado, las muestras fecales deben obtenerse tan pronto empiezan los primeros síntomas;
  3. Si el resultado de la prueba es NEGATIVO y la sospecha de la infección es muy fuerte puede ser conveniente repetir la prueba en una nueva muestra.
Horario de recepción de muestras

Lunes a Viernes de 7:15 AM a 8:30 PM
Sábados de 7:15 AM a 6:30 PM

Referencias
  1. Moosai RB et al. Detection of rotavirus by a latex agglutination test, Rotalex: comparison with electron microscopy, immunofluorescence, polyacrylamide gel electrophoresis, and enzyme linked immunosorbent assay. J Clin Pathol 1985;38:694-700 PubMed 2989342
  2. Ehrenkranz P et al. Rotavirus diarrhea disease burden in Peru: the need for a rotavirus vaccine and its potential cost savings. Pan Am J Public Health 2001;10:240-7 PubMed 11715170
  3. Anderson EJ et al. Rotavirus infection in adults. Lancet Infect Dis 2004;4:91-9 PubMed 14871633
  4. Török TJ et al. Visualizing geographic and temporal trends in rotavirus activity in the United States, 1991 to 1996. Pediatr Infect Dis J 1997;16:941-6 PubMed 9380468
  5. Festini F et al. Nosocomial rotavirus gastroenteritis in pediatric patients: a multicenter prospective cohort study. BMC Infect Dis 2010;10:235 PubMed 20696065
  6. Velazquez FR et al. Diarrhea morbidity and mortality in Mexican children. Impact of rotavirus disease. Ped Infect Dis J 2004;23:S149-S55 PubMed 15502694
  7. Committee on infectious diseases. Prevention of rotavirus disease: updated guidelines for use of rotavirus vaccine. Pediatrics 2009;123:1412-20 PubMed 19332437
  8. Staat MA et al. Clinical presentations of rotavirus infection among hospitalizaed children. Pediatr Infect Dis J 2002;21:221-7 PubMed 12005086
  9. Albano F et al. Rotavirus and not age determines gastroenteritis severity in children: a hospital-based study. Eur J Pediatr 2007;166:241-7 PubMed 16941130
  10. Kok TW et al. Comparison of five enzyme immunoassays, electron microscopy, and latex agglutination for detection of rotavirus in fecal specimens. J Clin Microbiol 1989;27:364-6 PubMed 2536758
Última revisiónEnero 2014