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Sección Parasitología
Código PA017
Nombre Ameba histolytica antígeno en sangre o absceso (ELISA)
Descripción

Detección de antígeno específico de Entamoeba histolytica (Gal/GalNAc lectin) mediante enzimoinmunoensayo de microplaca en fase sólida con anticuerpos monoclonales y policlonales en suero o aspirado de absceso.

Utilidad Clínica

Este examen es para ser utilizado en suero o aspirado de absceso en pacientes que están siendo evaluados por absceso hepático en los que se quiere determinar si la causa es Entamoeba histolytica.

Información clínica

El absceso hepático amebiano es la complicación más común de la amebiasis invasiva aunque la mayoría de pacientes con absceso hepático amebiano no tienen co-existentemente colitis amebiana (Haque R et al. N Eng J Med 2003;348:1565-73). El diagnóstico de absceso hepático amebiano se dificulta porque los síntomas son inespecíficos y pueden presentarse meses después de la infección intestinal inicial. A su vez, la infección intestinal inicial con E. histolytica puede ser asintomática o presentarse clínicamente con diarrea indistinguible de la diarrea por otras causas. La mayoría de pacientes con absceso hepático se presentan agudamente enfermos con fiebre y dolor abdominal. La posibilidad de absceso hepático es sugerida por el hallazgo de hepatomegalia dolorosa que se confirma con las imágenes características. Las imágenes, sin embargo, no permiten distinguir entre absceso piógeno y absceso amebiano. El diagnóstico serológico detectando anticuerpos contra E. histolytica tiene una utilidad limitada porque estos anticuerpos permanecen detectables por mucho tiempo después de la exposición inicial (Jackson TF et al. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1984;78:342–5). Un nivel elevado de anticuerpos contra E. histolytica, por tanto, no necesariamente indica que el absceso hepático sea de origen amebiano (Healy GR. Rev Infect Dis 1986;8:239-45). Se ha demostrado que durante la enfermedad, antígenos de E. histolytica circulan en sangre en pacientes con absceso hepático amebiano (Haque R et al. J Clin Microbiol 2000;38:3235-9). La detección de estos antígenos directamente en la pus del absceso o circulantes, como se hace en esta prueba, puede ayudar considerablemente en el diagnóstico de esta enfermedad. 

Muestra

Suero o aspirado de absceso

Recipiente

Tubo de borosilicato para el suero o vial estéril con tapa para el aspirado de absceso

Volumen

Mínimo 2 mL – Mayor cantidad si conjuntamente se solicitan otros exámenes

Instrucciones para obtención y transporte de la muestra

Obtener la muestra de sangre en tubo sin anticoagulante siguiendo el procedimiento estándar de veno-punción en vena periférica (preferentemente en la flexura del codo). Centrifugar y separar el suero inmediatamente después de la retracción del coágulo. Refrigerar el suero hasta su envío al laboratorio. Si es aspirado de absceso, el recipiente deberá ser puesto en refrigeración inmediatamente y durante su transporte al laboratorio. Congelar la muestra, sea suero o aspirado de absceso, si no puede ser enviada al laboratorio antes de 24 horas de obtenida.

Método de análisis

Enzimoinmunoensayo (ELISA) de microplaca en fase sólida con anticuerpo policlonal. Los pocillos de la microplaca de titulación están recubiertos con anticuerpo policlonal inmovilizado que enlaza la adhesina de E. histolytica. El conjugado es un anticuerpo monoclonal conjugado con peroxidasa, específico para la adhesina de E. histolytica. En el ensayo con suero, una alicuota de la muestra sin diluir se añade al pocillo. En el ensayo con pus de absceso, la muestra se agita en vórtex, se centrifuga y una alicuota sin diluir se añade al pocillo. Si la adhesina está presente en la muestra durante la fase de incubación ésta se adhiere al conjugado y a los anticuerpos policlonales inmovilizados. Cualquier material no adherido es eliminado durante los pasos de lavado. Con la adición del substrato, se desarrolla color debido a la presencia de complejos enzima-anticuerpo-antígeno que se forman en presencia de la adhesina. La intensidad de la reacción de color se determina leyendo su absorbancia en espectrofotómetro a 450/620 nm. La absorbancia se expresa como positiva o negativa según el valor límite pre-establecido (cut off).

Rango de resultados Positivo o negativo
Rango normal

Negativo, no hay antígeno de E. histolytica

Tiempo de entrega de resultados

6 – 12 horas desde recibida la muestra

Interpretación de resultados

Esta prueba en formato ELISA detecta específicamente el antígeno de Entamoeba histolytica Gal/GalNAc lectin que puede estar presente en el contenido aspirado de un absceso o circulando en sangre. La especificidad de esta prueba es de 100% (Haque R et al. J Clin Microbiol 2000;38:3235-9). Un resultado POSITIVO con esta prueba, por tanto, confirma el diagnóstico de absceso hepático amebiano. Si el resultado se informa NEGATIVO es probable que no haya realmente absceso hepático amebiano. Esta prueba tiene una sensibilidad de 96% siempre y cuando la muestra haya sido tomada antes de la administración de metronidazol; en pacientes que han recibido metronidazol hasta dos semanas antes de la obtención de la muestra la sensibilidad de la prueba decae a 15% (Haque R et al. J Clin Microbiol 2000;38:3235-9). Esta prueba es específica para E. histolytica, un resultado POSITIVO ó NEGATIVO con esta prueba no excluye la presencia de otros agentes infecciosos. Esta información es sólo para ser tomada en cuenta. El médico es el más indicado para decidir lo que se deba hacer en base a los síntomas, el cuadro clínico y el resultado de esta prueba.

Limitaciones y recomendaciones
  1. Mantener la muestra refrigerada desde su obtención hasta su llegada al laboratorio; el antígeno de este parásito puede deteriorarse en muestras expuestas a temperaturas elevadas durante el transporte al laboratorio;
  2. El almacenamiento prolongado de la muestra en congelación (-20°C) preserva la integridad del antígeno.
Horario de recepción de muestras

Lunes a Viernes de 7:15 AM a 8:30 PM
Sábados de 7:15 AM a 6:30 PM

Referencias
  1. Haque R et al. Amebiasis. N Eng J Med 2003;348:1565-73 PubMed 12700377
  2. Jackson TF et al. Serological differentiation between past and present infection in hepatic amoebiasis. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1984;78:342–5 PubMed 6087510
  3. Healy GR. Immunologic tools in the diagnosis of amebiasis: epidemiology in the United States. Rev Infect Dis 1986;8:239-45 PubMed 2871620
  4. Haque R et al. Diagnosis of amebic liver abscess and intestinal infection with the TechLab Entamoeba histolytica II antigen detection and antibody tests. J Clin Microbiol 2000;38:3235-9 PubMed 10970364
Ultima revisión Enero 2014


 

 

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